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  • 1
    ISSN: 0926-6550
    Source: Elsevier Journal Backfiles on ScienceDirect 1907 - 2002
    Topics: Biology
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 2
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Notes: Zusammenfassung Mit einer vereinfachten Methodik der röntgenhistoradiographischen Trockengewichtsbestimmung ohne Referenzsystem wurden vergleichende Untersuchungen mit dem Bakerschen Interferenzmikroskop an Zellausstrichen von Bullenspermien und -thymuslymphocyten, Froscherythrocyten und Plattenepithelien der menschlichen Mundschleimhaut durchgeführt. Die gewonnenen Ergebnisse stimmen gut überein. Die Abweichungen betragen etwa 10%. Sie geben einen Einblick in die Fehlerbreite beider Methoden und bestätigen insbesondere die Genauigkeit der von uns angewandten quantitativen röntgenhistoradiographi schen Methodik.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 3
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Description / Table of Contents: Znsammenfassung Infolge der geringen Haftbarkeit von Zellen während der Zellteilung können 95–98% Mitosezellen aus Monolayer-Kulturen gewonnen werden. Die Zusammensetzung der Glasoberfläche, Ca++-Mg++-Gehalt des Mediums, Temperatur, Dichte des Zellrasens und Stärke der Scherkräfte bestimmen die Reinheit des Präparates. Die Zellen bestehen aus etwa 50% Telophasen und 20% Metaphasen, 10% Anaphasen, 10% Prophasen, 2% Interphasen und 3% Pyknosen. Nach Wiedereinpflanzung durchlaufen 95% dieser Zellen einen ganzen Zellzyklus. Mikrokinematographisch wurde eine mittlere Generationszeit von 22 Std±17,5% ermittelt. Der Unterschied in der Generationszeit von Zelle zu Zelle und die damit verbundene progrediente Desynchronisierung ist der größte Nachteil bei der Verwendung dieses Zellsystems.
    Notes: Summary Preferential detachment of dividing cells from a monolayer of confluent L-cells is used as a method to synchronize cells. 95% of the selected cells are in mitosis. Purity of the cell preparation depends on the surface qualities of the glass, Ca++-Mg++ concentration in the medium, temperature, density of the monolayer and intensity of sheering force used. The cell preparation consists of 50% telophases, 20% metaphases, 10% anaphases, 10% prophases, 2% interphases and 3% pyknotic cells. Upon reimplantation 95% of these cells reach the 2. mitosis in a synchronous wave. Microcinematographic registration showed an average generation time of 22 hours±17,5%. Progressive desynchronization within one cycle is due to differences in generation time.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 4
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung In einem teilungssynchronen Zellsystem wird die DNS-Synthese mit biochemischen, quantitativ histochemischen und autoradiographischen Methoden studiert. Die DNS-Synthese dient dabei der Kontrolle der Synchronisation. Mehr als 95% der Zellen werden vom synchronisierenden Prinzip erfaßt; ca. 80% der Zellen beginnen innerhalb von 3 Std mit der DNS-Replikation. Mit den ergänzenden quantitativ-morphologischen Methoden konnte ein zweistufiger Ablauf der DNS-Synthese wahrscheinlich gemacht werden.
    Notes: Summary DNA-synthesis as determined by biochemical, cytochemical and autoradiographic methods served as an indicator for the degree of synchrony in a mechanically synchronized monolayer culture of L-cells. Within about 3 hours 80% of the cells enter S-phase. From experiments with asynchronously growing cells a two step kinetic of DNA-synthesis has been made probable.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 5
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung An globulinfreien, alkoholfixierten Thymuslymphozyten und nach Behrens isolierten Leberzellkernen der Ratte wurden im Ausstrichpräparat die DNS mit DNase, 5% Trichloressigsäure und dem Netzmittel Duponol, die Histone mit 0,2 n Salzsäure und das Deoxyribonukleoproteid mit 1 m und 2 m Kochsalzlösung extrahiert. Die Ahnahme der Kerntrockenmasse wurde interferenzmikroskopisch gemessen und der DNS-, Histon- und Gesamtproteingehalt cytophotometrisch bestimmt (Feulgen-Reaktion, Färbung mit Gallocyanin-Chromalaun, Fastgreen bei pH 8 und 2, Naphtholgelb S). DNase führte bei 40° C innerhalb von 2 Std bei diploiden Thymuslymphozyten zu einem Trockengewichtsverlust von 10×10−12g, wobei 80% der DNS und 4–5×10−12g der Zell-kernproteine extrahiert wurden. Am schnellsten wurden euchromatische Kernbezirke abgebaut. Bei diploiden Leberzellkernen fand sich ein Substanzverlust von 9–10×10−12 g. Gleichzeitig mit der DNS wurden Histone extrahiert, der Anteil säurelöslicher Histone war nach DNase signifikant reduziert. 5% TCE von 90° C führte bei Thymuslymphozyten nach 15 min zu einem Trockengewichtsverlust von 10×10−12g, der sich aus Histonen und 95% der DNS zusammensetzt. Mit der Fastgreen-Färbung kann daher nach Alkoholfixierung nur ein Teil der basischen Kernproteine erfaßt werden. An histonfreien Zellkernen wurden DNS und RNS selektiv extrahiert (7,5×10−12g). Bei Extraktion von Lymphozyten bei 60° C wurden im Feulgen-Hydrolysemaximum ein Substanzverlust von 2,5×10−12g und ein Bestand von 50% der DNS-Phosphatgruppen gemessen. Während der DNS-Extraktionen bestand gute Übereinstimmung zwischen dem interferometrisch und cytophotometrisch gemessenen Proteingehalt der Zellkerne. Eine stärkere Zunahme der Proteinazidophilie durch Hydrolyse des Nukleoproteids war nicht festzustellen. Durch 0,5% Duponol von 3–5° C wurden innerhalb 1 Std 12×10−12g der Trocken-masse von Lymphozyten extrahiert, während DNS-Gehalt und Proteinazidophilie nur um rund 40% abnahmen. Bei Behandlung mit 0,2 n HCl von 3–5° C fand sich nach 1 Std bei Lymphozyten ein Proteinverlust von 6,5×10−12g und bei Leberzellkernen von 8×10−12g, danach kam es zur Hydrolyse der DNS. Die Lösung der Histone verlief kontinuierlich, die Histonazidophilie wurde bis 15 min sehr rasch, danach langsamer reduziert. Der DNS-Histonquotient lag bei I, mit biochemischen Histonbestimmungen bestand gute Übereinstimmung. Offenbar wurden die basischen Kernproteine vollständig und selektiv erfaßt. Die Extraktion des Deoxyribonukleoproteids (DNS, Histone und Nichthistonprotein) mit 1 m NaCl-Lösung von 3–5° C gelang aus unfixierten Leberzellkernen nur unvollständig, da nach 20 Std ein Trockengewichtsabfall von nur 20% gemessen wurde. Nach Alkohol-fixierung scheint die Fraktion in 1 m und 2 m NaCl unlöslich zu sein.
    Notes: Summary From globulin-free, alcohol-fixed lymphocytes of the thymus gland and liver nuclei of the rat, isolated with Beheens' technique, DNA was extracted with DNase, 5% trichloracetic acid and the detergent Duponol, histones with 0.2 N hydrochloric acid and the deoxyribonucleoprotein with 1 M and 2 M saline in smears. The decrease of nuclear dry mass was measured with the interference microscope, and the content of DNA, histones and total proteins determined by cytophotometry (Feulgen reaction, staining with gallocyanin chrome alum, fast green at pH 8 and 2, naphthol yellow S). DNase at 40° C caused a loss of 10×10−12g of the nuclear dry mass of diploid thymocytes within 2 hours, comprising 80% of DNA and 4–5×10−12g of nuclear proteins. Euchromatin was digested first. Diploid liver nuclei showed a loss of dry weight of 9–10×10−12g. With DNA histones were extracted. The content of acid-soluble histones had significantly decreased after DNase. After exposure to 5% TCA at 90° C was found after 15 min a loss of 10×10−12g of the dry matter of lymphocytes, consisting of histones and 95% of nuclear DNA. Therefore, only a part of basic proteins of the nucleus can be stained with fast green after fixation with alcohol. DNA and RNA could be removed electively (7.5×10−12g) from nuclei, which were free from histones. Extracting lymphocytes with 5% TCA at 60° C, a loss of dry matter of 2.5×10−12g and 50% of DNA-phosphate-groups was measured at the Feulgen hydrolysis maximum. During the extraction of DNA there was good agreement between the content of nuclear proteins determined by interferometry and cytophotometry. No remarkable increase in acidophilia of proteins could be detected during hydrolysis of nucleoproteins. Within 1 hr 12×10−12g of the dry matter of thymocytes was removed by 0.5% Duponol at 3–5° C, whereas DNA and acidophilia of proteins decreased by only 40%. Lymphocytes being exposed to 0.2 N HCl at 3–5° C showed after 1 hr a protein loss of 6.5×10−12g, exposing liver nuclei 8×10−12g. After this DNA was hydrolyzed. Histones were removed continuously, acidophilia of basic proteins decreased very fast up to 15 min then more slowly. DNA-to-histone ratio was about 1. There was good agreement with biochemical measurements of histones. Obviously, basic nuclear proteins were extracted exhaustively and electively. The extraction of the deoxyribonucleoprotein with 1 M saline at 3–5° C (DNA, histones and non-histoneprotein) from unfixed liver nuclei was only partially possible, since a loss of dry weight of only 20% could be detected after 20 hrs. After fixation with alcohol, this fraction appears to be insoluble in 1 M and 2 M saline.
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  • 6
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung Aufgrund eigener experimenteller Erfahrungen werden die verschiedenen Methoden der Gewebspräparation für cytophotometrische Zwecke beschrieben. Ausgehend von verschiedenen Fragestellungen wird das Problem der DNS-Messungen an Zellkernen, die Messungen an homogenen Objekten und die Frage der Messungen an cytoplasmatischen Substanzen in Gewebsschnitten behandelt. Es wird eine Quetschtechnik zur Präparation ganzer Zellen speziell für das ZNS beschrieben.
    Notes: Summary Based on experimental results the author describes various methods for the preparation of tissue for cytophotometric investigations. The problem of DNA-measuring in cell nuclei, the measuring of homogeneous objects, and the measuring of cytoplasmic substances in tissue sections are investigated under various aspects. A special squashing technique for the preparation of complete cells from the central nervous system is described.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 7
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung Zur Frage funktioneller DNS-Veränderungen wurde der DNS-Gehalt von Zellkernen unter dem Einfluß folgender verschiedener experimenteller Bedingungen an Rattenorganen zytophotometrisch bestimmt: 1. im Nebennierenmark nach intermittierender Kälteeinwirkung (300 Std), 2. im Bereich der Zona glomerulosa, Zona fasciculata, Zona reticularis der Nebennierenrinde nach ACTH bzw. Cortisonbehandlung, 3. in der Schilddrüse nach Thyroxin, TSH bzw. Kältebehandlung. Unter sämtlichen Versuchsbedingungen blieb die DNS-Menge pro Zellkern in den verschiedenen Organen konstant. Eine Erhöhung der Mittelwerte des DNS-Gehaltes in Nebennieren (ACTH) und Schilddrüsen (TSH bzw. Kälte) ist durch S-Phasenzellkerne bedingt. Das Ergebnis dieser Untersuchungen steht in Widerspruch zu den Befunden anderer Autoren, die unter denselben Versuchsbedingungen in den gleichen Organen funktionelle DNS-Veränderungen gefunden haben. Die Ursache dieser Diskrepanz konnte nicht geklärt werden.
    Notes: Summary Concerning the functional DNA changes the DNA content of the cell nuclei was defined cytophotometrically under the reaction of the following different experimental conditions at rat organs: li 2. within the region of Zona glomerulosa, Zona fasciculata, Zona reticularis of the suprarenal gland cortex after the use of ACTH, respectively after a cortison therapy, 3. in the thyroid gland after the use of thyroxin, TSH respectively low temperature shock. The DNA content per cell nucleus remains constantly in the different organs in all experimental conditions. An increase of the mean values of the DNA content is dependent on the S-phase cell nuclei in the suprarenal gland and in the thyroid gland (TSH respectively cold). The result of this investigation is in contradiction to the results of other authors who found functional DNA changes in the same organs under the equal experimental conditions. The cause of this discrepancy could not be explained.
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  • 8
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Notes: Summary Specific biochemical events in the mitotic cycle of cells can be investigated in synchronous cell cultures. In the work presented here, synchronization was accomplished by mechanical selection of cells in mitosis. This method produces a cell population of 95% mitotic cells, representing an undisturbed physiological system, where factors can be investigated which initiate DNA synthesis. With the aid of Actinomycin D, a drug known to inhibit DNA-dependent RNA synthesis the problem was investigated whether specific transcription in the G1-phase or S-phase is necessary for the initiation and maintenance of DNA synthesis. Permanent contact of Actinomycin D with synchronous cell cultures leads to a total block of DNA synthesis, when administered in the G1-phase, and a decrease in the rate of DNA synthesis when applied during the S-phase. Pulses of 2 hours of Actinomycin at different times of the mitotic cycle lead to a diminished rate of DNA synthesis. These experiments are suggestive of a specific, temporally limited transcription during the G1-phase necessary for the initiation of DNA synthesis. Apparently the information for the synthesis of enzymes is produced during this period of the life cycle. The morphology of Actinomycin D-treated cells is characterized by two different features: the nucleoli assume a round, compact shape and appear to be split into a multitude of smaller granular subunits. The chromatin also undergoes a shift towards a fine granulation.
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  • 9
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Notes: Zusammenfassung In der vorliegenden Untersuchung werden die Voraussetzungen für eine quantitative zytophotometrische Auswertung der gekuppelten Tetrazonium-reaktion nachBurstone (1955) geprüft. Die Blockierungsversuche zeigen, daß die Reaktion mit Benzoylchlorid blockiert und mit Azetanhydrid abgeschwächt ist. Das Ergebnis der Reaktion in Ausstrichversuchen wird wahrscheinlich durch unspezifische Adsorption und Löslichkeit der geprüften Substanzen beeinflußt. In Versuchen an Gelatine, Leber und Schilddrüse wird die Reproduzierbarkeit der Reaktion (stabiles Absorptionsmaximum mit Plateau bei λ 580 mµ) und die Gültigkeit des Lambert-Beerschen Gesetzes demonstriert.
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  • 10
    ISSN: 1432-119X
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung Die Akriflavin-Feulgen-Färbung (Böhm und Sprenger, 1968) und die Ethidiumbromid-Fluorochromierung nach vorausgehender Pepsinbehandlung (Göhde et al., 1971) ergeben an Leberzellausstrich-Präparaten weitgehend gleichartige DNS-Häufigkeitsverteilungen. Bei der zeitlich aufwendigen (220 min) Akriflavin-Färbung ist eine optimale Darstellung der Zellmorphologie und eine jahrelange Archivierung der Ausstrichpräparate möglich. Die rasch durchführbare Ethidiumbromid-Färbung (70 min) bietet nur nach schwerer Alteration der Zellmorphologie durch die vorausgehende Pepsinbehandlung eine selektive Darstellung der DNS. Eine Archivierung von Ausstrichpräparaten ist nur für 2 Tage möglich. Die schwere Alteration der Zellmorphologie ist besonders bei durchflußphotometrischen Prescreeninguntersuchungen in der gynäkologischen Krebsvorsorge nachteilig. Zellpopulationen, die zu einer zytophotometrischen Verdachtsdiagnose geführt haben, sind durch Verlust des Zytoplasmas und der Kernstruktur einer konventionellen morphologischen Diagnostik nicht mehr zugängig.
    Notes: Summary Acriflavine-Feulgen (Böhm und Sprenger, 1968) and ethidiumbromide fluorescence after previous pepsin digestion (Göhde et al., 1971) yield corresponding DNA distribution patterns when applied to liver smears. With the time-consuming acriflavine staining (220 min) the cellular morphology is best preserved and the stained specimen may be stored for long periods. The rapidly obtainable ethidiumbromide staining (70 min) results in a selective fluorescence of DNA only after heavy alteration of the cellular morphology by pepsin digestion. Storage of the material is only possible for two days. The heavily altered cellular morphology, however, is rather unfavorable for prescreening in automated cytology. Specimens that were found to be suspicious are no longer suitable for conventional cytological diagnosis, because they have lost their cytoplasm and nuclear chromatin structure.
    Type of Medium: Electronic Resource
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